PCR实验室通风系统流程是什么

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PCR实验室通风系统流程是什么

PCR实验室通常采用非单向流送风方式，所谓非单向流，指气流流线方向不平行，风速也不一致。非单向流的气流组织方式有上送下回式、上送下侧回式、测送下回式、上送上回式、PCR实验室一般采用上送下回式。上部送风依靠高效送风口进入房间，下部回风依靠每个房间的对称分布的排风柱下部的排风口排风。
新风从室外进入处理机组，经过粗效、中效、亚高效、表冷(热)段、喷淋段(加湿)几个处理过程，然后进入洁净室。
排风分为全面换气与局部排风两部分，全面排风口一般位于排风柱的下部，设可调带过滤网的百叶风口，送风口采用高效过滤送风口。局部排风为房间设置Ⅱ级B2型生物安全柜的局部排风，柜面风速要求不小于5m/s，生物安全柜独立设置排风系统，排风口要求设置在建筑物的屋面上，生物安全柜排风管与所在室内的全面排风互锁，局部排风与全面排风不能同时开启。新风机组与排风系统都采用变频系统，以应对不同变风量处理过程。
空气过滤要求:
实验室的送风经过净化过滤，需达到国家规范要求，实验室完工后，需经过测定送风颗粒物的浓度。颗粒物浓度不小于0.5μm，过滤效率95＜η＜99.9，阻力不大于120Pa，处理效率为大气尘计数效率，满足此要求，可达到PCR实验室室内处理空气标准，方可满足实验室使用要求。

pcr实验室建设标准是什么?

这里从PCR实验室布局、工作区域的主要功能和设备配置、实验室的通风系统及压力控制及其他注意事项来解说。

基因扩增实验又称PCR实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域。

例如：艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证、动植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。

PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊，各工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。

不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密相连，需安装物品传递窗。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区，扩增前区与扩增后区应严格分开。

1、试剂准备区：主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品*的材料应直接运送至该区，不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。对于气流压力的控制，本区并没有严格的要求。

2、样品制备区：主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

3、扩增区：该区域的功能是DNA扩增和扩增片段的测定。此外，反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液和已制备的DNA模板(来自标本制备区)的加入等也可在本区内进行。对于气流压力的控制，相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。

为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。该区域的设备主要是核酸扩增热循环仪、加样器、超净台等。

其中热循环仪的电源应专用，并配备一个稳压电源或UPS，以防止由于电压的波动对扩增测定的影响主要进行DNA扩增。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。

4、扩增产物分析区：扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。

各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式，严格控制送、排风的比例以保证各实验区压力要求。
另外，PCR实验室内通常有生物安全柜、通风柜等生产设备，这类设备排风量大且使用时间有间隔性，并不与空调系统运行时间一致，这就导致有这些设备的房间在设备启停的时候很容易失压，原本正常的压力梯度瞬间就破坏了。这正是PCR实验室空调系统设计的难点所在。

实验室围护结构应牢固、气密性好。所有阴阳角宜采用圆弧过渡，墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒。地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪，材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。

PCR实验室建设中的关键控制点

PCR Laboratory Critical Control Point)：
1 实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
1.1 试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本*的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
1.2 标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
1.3 扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
1.4 扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
2 污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。
2.1 工作区域的严格划分
（1）各个实验区域设置合理；
（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
2.2 合理的系统设置
（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；
（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。
2.3 规范的操作
（1）临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；
（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；
（3）清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。
2.4 严格的管理
（1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；
（2）在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域；
（3）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
（4）扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；
（5）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。
2.5 完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。

新建pcr实验室需要通风多久才能使用

30分钟。
要定期对房间进行通风，每次至少持续30min。PCR扩增区去污染：PCR反应管必须盖紧，避免扩增后的核酸对环境的污染。造成不必要的影响。

闸述如何理解PCR实验室设计原则“独立分区、注意风向、因地制宜”?

1. 要有紧连PCR实验室的高压灭菌锅。
2. PCR实验室内每个房间的所有进、出风口均需加装高效过滤器。
3. 标本处理间必须配备A2生物安全柜和通风橱并有外连，外连出口需加高效过滤膜。
4. PCR实验室的压力梯度，从高到低单一流向：试剂制备区--标本制备区--扩增区--产物分析区，建议调整为：试剂制备区+10pa＞标本制备区0pa＞扩增区—10pa＞产物分析区—15pa～—20pa。缓冲间压力梯度为 试剂制备区—10pa、标本制备区—10pa、扩增区—5pa、产物分析区—10pa。
5. 外走廊内距离标本制备区的门最近的地方加装一个水池（手卫生用），并放一个半截柜（用于存放和穿防护服等）；标本制备区实验室内有两个水池（一个倾倒废液，一个用于手卫生），此区的缓冲间加装一个水池（用于脱防护服时手卫生）。
6.建议紧邻PCR实验室洁净区设置厕所、淋浴房和休息间。

核子诺亚方仓是什么

核子诺亚方舱主要指的是PCR放舱实验室。

这个词语出自莆田的疫情防控之中。援莆的方舱是标准的移动PCR方舱实验室。这种集装箱式方舱实验室具备灵活、可移动的特征，可以根据疫情发展和实际需求，快速部署到指定区域，实现“及时部署、快速检测”。

实验室命名为核子诺亚方舱，希望能在疫情这个特殊时刻，像诺亚方舟一样，为人们的生命健康护航。

实验室的启用，可以随到随检，不用送到医院实验室，节约起码1小时的等待时间。方舱实验室可以快速部署，以及扩容，工厂可以批量生产。满足各地区的抗疫需求。方舱实验室在30平方米左右。在这个小面积的厢体内，功能齐全，可以通过合理的试剂。

通风系统的改造，人流，气流，物品都是单向流动的。保障了检测人员的安全性。方舱实验室可以防止突发公共卫生事件。快速反应检测应对。国外疫情持续恶化，机场、边境口岸面临极大挑战，区域也有感染出现，机场口岸方舱实验室需要高效，规模化。

边境地区需要移动PCR实验室，可以机动化移动检测。大型交通枢纽，学校，大集团公司,疾控系统都需要部署方舱实验室，移动PCR实验室。

PCR实验室污染了怎么处理？

A. 实验室进行通风处理，至少2 周的时间；
通风可加速扩增产物的消散的速度
B. 使用清水对实验台面、实验室进行清洗；
DNA不溶于酒精，使用清水多次擦拭后可消除附在实验台面等的核酸DNA；
C. 使用紫外灯进行房间的照射；
紫外线及产生的臭氧都有破坏DNA结构的作用
D. 之前使用的灭菌锅使用清水清洗多次，不要和耗材等在一起灭菌；
E. 可用1mol/L 的盐酸对可疑器具或者实验台面进行浸泡或擦拭。
盐酸可使DNA脱嘌呤，破坏DNA的结构。
F. 若有条件，选择一个新的实验环境进行检测实验最好。

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标准的PCR实验室简介
1、主体结构:
主体为彩钢板、铝合金型材.室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题.结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好.
2、标准的三区分隔和气压调节:
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区.整个区域有一个整体缓冲走廊.每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染.
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和PCR扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气.
3、消毒:
在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用.
在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒.
4、机械连锁不锈钢传递窗:
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流).
5、地面
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好.便于进行清扫,耐腐蚀.没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mmt800mm)接缝需要小于2mm.
6、照明
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点.
标准的PCR实验室在建设的过程中应注意:
规范的安装流程和全面的服务流程.
严格按照规范科学设计的安装流程.
安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,*网络线进线位置,进水水压,实验室家具,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸和通风口尺寸.
1.1.1 PCR 实验室基本要求
2.1 PCR 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域.只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室,有上述前面三个区域即可.各区域应完全独立分隔,不应有任何的空气直通.
2.2
标准的PCR实验室产物分析区或三个区域的最后一个区域(即扩增及产物分析区),空气流向应由室外向室内,可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求.
2.3 PCR实验室各区域仪器设备配备通常如下:
2.3.1
标准的PCR实验室试剂准备区:
仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等.可使用超净工作台作为试剂配制操作台面.
2.3.2
标准的PCR实验室标本制备区
仪器设备主要应有生物安全柜(最好为B2, 可避免提取核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉"污染",出现假阳性结果.此外还应配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设备(水浴和/或干浴仪)、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等.
2.3.3
标准的PCR实验室扩增区
主要仪器就是核酸扩增热循环仪(PCR仪,实时荧光或普通的).热循环仪的电源应专用,并配备一个稳压电源或UPS,以防止由于电压的波动对扩增测定的影响.此外,根据工作需要,还可配备加样器、超净台等.
2.3.4
标准的PCR实验室产物分析区:
本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪(槽)、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、酶标仪和洗板机等.
The equipment here may be pipette, electrophoresis system capillary, transblot system, chest/ oven molecule hybridization, water bath, DNA sequencer, microplate-reader for ELISA, microplate washer and so on.
建议Recommendations
在理想情况下,PCR实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间.在缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内.
PCR实验室平面布置示意图
一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,
主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行
一般实验室间隔材料分:彩钢板,不锈钢板,理化板等,价格依次而上,
主要考虑不产尘,不滋菌,容易清理就行
**卫生部PCR研究员李金明(卫生部临床检验中心临床免疫室主任,研究员)的PCR建设方案再说吧!国外的资料不一定是最好.个人觉得李金明的实验室区正压(扩增分析区因为没有缓冲,所以为负压),缓冲间负压的作法可以更好的防止气体的外泄及防止试剂准备区、标本制备区、产物扩增区、扩增分析区四区之间的气体相互渗漏.PCR实验室也可以分为三个区,即第三、四区合为一区,必须设立缓冲间.有条件建设实验室采用三十万级的标准来建设.空调系统采用制冷剂各区独立循环,可以防止气流交叉.
**疾病预防控制中心实验室建设之PCR 实验室基本要求:
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式.完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程.
一、分散形式PCR实验室
所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式.对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求.
二、组合形式PCR实验室
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式.对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求.各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换.试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品.
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并.
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊.需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义.
**PCR实验区的设置,几个要注意的问题:
1、几个区域的大小设置情况,应该是试剂准备区、产物扩增区、扩增分析区,要小一些.标本制备区应大一些.因为,标本制备室要放置一个生物安全柜为一个低温冰箱.
2、试剂准备区、标本制备区就设立紧急洗眼器,以备不时之需.
3、PCR实验室的洁净度可以根据用户的实际使用情况和资金的投入来设计.
**临床基因扩增检验实验室基本设置标准
根据《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》,制定本标准
一、 临床基因扩增检验实验室区域设置原则
(一) 临床基因扩增检验实验室区域设置原则
1、 试剂储存和准备区
2、 标本制备区
3、 扩增反应混合物配制和扩增区
4、 扩增产物分析区
如使用全自动分析仪,区域可适当合并.
(二)各工作区域必须有明确的标记,避免不同工作区域内的设备、物品混用.
(三)进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即试剂储存和准备区 m>标本制备区m>扩增反应混合物配制和扩增区m>扩增产物分析区.
(四)不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色).工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出.
二、 工作区域仪器设备配置标准
(一) 试剂储存和准备区
1、2-8C和-15C冰箱
2、混匀器
3、微量加样器(覆盖1-1000ul)
4、移动紫外灯(近工作台面)
5、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
6、专用工作服和工作鞋
7、专用办公用品
(二) 标本制备区
1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
2、高速台式冷冻离心机
3、混允器
4、水浴箱或加热模块
5、微量加样器(覆盖1-1000ul)
6、可移动紫外灯(近工作台面)
7、超净工作台
8、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
9、专用工作服和工作鞋
10、专用办公用品
如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪.
(三) 扩增反应混合物配制和扩增区
1、 核酸扩增仪
2、 微量加样器(覆盖1-1000ul)
3、 可移动紫外灯(近工作台面)
4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
5、 专用工作服和工作鞋
6、 专用办公用品
(四)扩增产物分析区
视检验方法不同而定.基本仪器设备如下:
1、 微量加样器(覆盖1-1000ul)
2、 可移动紫外灯(近工作台面)
3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)
4、 专用工作服和工作鞋
5、 专用办公用品
为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.
1、样品准备区
这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采
取预防措施:
1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作.
2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA.
3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列.
4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留.
5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取.
6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶.
7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换.实验服要专门用于样品准备间,经常清洗.
2、样品准备和RNA-PCR
RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会.为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行.在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道.
3、前PCR区
必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染.前PCR区必须要有试剂和准备,实验室设备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管.
4、PCR实验室试剂的操作
1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染.
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22mm过滤的,并且是高压灭菌.
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应.
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存.
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子.
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验.
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存.
5、在前PCR区建立PCR混合物
1)可以把即刻可用的"主混合物"溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用.
2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分.
3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度.而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物.
4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂.
5)当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸.
6)由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑.
6、控制污染的方法
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染m使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染.另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级.
7、PCR仪的位置
8、后PCR区PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方.后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动.
**临床基因扩增检验实验室管理暂行办法
第一章 总则第一条为规范临床基因扩增检验实验室管理,保证临床基因扩增检验质量,使临床诊断和治疗更为科学、合理,特制定本办法.
第二条临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的,以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术,如聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)、转录依赖的放大系统(TAS)自主序列复制系统(3SR)和链替代扩增(SDA)等.
第三条本办法适用于开展临床基因扩增检验的实验室.临床基因扩增检验实验室设立在二级以上医院.
第四条临床基因扩增检验实验室必须使用经国家药品监督管理局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验项目.
第五条卫生部临床检验中心(以下简称卫生部临检中心)和省、自治区、直辖市临床检验中心(以下简称省临检中心)负责对所辖行政区域内临床基因扩增检验实验室的质量监督管理工作.
第二章 实验室设置和验收
第六条拟设置临床基因扩增检验实验室的医疗机构按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》(见附件)筹建实验室;筹建完成后,由法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请.申请时需提交以下材料:
(一)《医疗机构执业许可证》复印件;
(二)可行性研究报告;
1、拟设临床基因扩增检验实验室机构的所在地医疗卫生资源状况、本机构的基本情况、对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增实验室运行的预测分析;
2、 拟设临床基因扩增检验实验室的设置平面图;
3、拟设临床基因扩增检验实验室将开展的检验项目、实验设备条件和有关技术人员资料
第七条卫生部临检中心和省临检中心共同组织相关专业的专家组(以下简称专家组),按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》对提出申请的临床基因扩增检验实验室进行技术验收.验收完成后,在20日内将验收报告寄送至申请机构.
第八条经专家组技术验收合格的医疗机构将本办法第六条规定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案.在将符合规定的全部材料送达省级卫生行政部门后15日内未收到省级卫生行政部门不同意的意见,方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验项目.
第九条未经专家组验收合格并报省级卫生行政部门备案的医疗机构不得擅自开展临床基因扩增检验项目.
第三章 实验室监督管理
第十条临床基因检验实验室必须按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》(另发)开展临床基因扩增检验工作.
第十一条临床基因扩增检验实验室技术人员必须进行上岗培训.经培训合格者,由培训单位发给合格证书,并将培训合格人员名单报卫生部临检中心备案.获得培训合格证书者方可从事临床基因扩增检验工作.
培训单位为卫生部临检中心,或由省级卫生行政部门指定并经卫生部临检中心认定的机构.培训时使用规定的*材.
第十二条以科研为目的的基因扩增检验项目.不得向临床出具检验报告,不得向病人收取任何费用.
第十三条临床基因扩增检验实验室必须按照《临床基因扩增实验室工作规范》开展室内质量控制,并参加卫生部临检中心组织的室内质量评价.
第十四条卫生部临检中心按照本方法和《临床基因扩增实验室工作规范》协调、组织省临检中心对临床基因扩增检验实验室的检验质量进行监测.监测结果报省级卫生行政部门,同时抄送被监测的临床基因扩增检验实验室所在医疗机构.
第十五条卫生部临检中心或省级临检中心受省级以上卫生行政部门委托可对临床基因扩增检验实验室进行现场检查,现场检查工作人员在履行职责时应出示证件.在进行现场检查时,检查人员有权调阅有关资料,被检查机构不得拒绝或隐瞒.
第十六条卫生部临检中心对在室间质量评价中不合格的临床基因扩增检验实验室提出警告,对连续二次或三次中有二次发现临床基因扩增检验结果不合格的临床基因扩增检验实验室,卫生部临检中心报省级以上卫生行政部门由省级以上卫生行政部门责令其暂停有关临床基因扩增检验项目,限期整改.经专家组进行再次技术验收并合格,并报省级卫生行政部门核准后,方可重新开展临床基因扩增检验项目.
第十七条对于未经卫生部临检中心组织的专家组技术验收合格并报省级卫生部门备案,擅自开展临床基因检验项目的医疗机构,由省级卫生行政部门依据《医疗机构管理条例》第四十七条和《医疗机构管理条例实施细则》第八十条予以处罚,并予以公告.公告所需费用由被公告机构支付.
第十八条出现下列情况之一的临床基因扩增检验实验室,由省级卫生行政部门责令其停止开展临床基因扩增检验,并对其所在医疗机构予以公告.公告所需费用由被公告机构支付:
(一)开展超出卫生部临检中心组织的技术验收合格并报省级卫生行政部门备案 临床基因扩增检验项目的;
(二)使用未经国家药品监督管理局批准的试剂开展临床基因扩增检验的;
(三)在临床基因扩增检验中未开展室内质量控制的;
(四)在临床基因扩增检验中未参加室间质量评价的;
(五) 在临床基因扩增检验中弄虚作假的;
(六)以科研为目的的基因扩增检验项目向病人收取费用的;
(七)使用未经培训合格的专业技术人员从事临床基因扩增检验的;
第四章 附则第十九条对采供血机构的基因扩增检验实验室开展基因扩增检验项目的管理,参照本办法执行.
第二十条卫生部临检中心组织的专家组对申请开展临床基因扩增检验的实验室进行技术验收所需费用按国家有关规定执行.
第二十一条 本办法由卫生部负责解释.
第二十二条 本办法自发布之日起施行.

万级无菌室和P2实验室的区别还有就是PCR实验室具体的定义是什么?

p2实验室：
1、 符合BSL-2实验室建设要求.
2、 实验室门口带锁并可自动关闭.实验室的门应
有可视窗.
3、 有足够的存储空间摆放物品以方便使用.在实
验室工作区域处还有供长期使用的存储空间.
4、 在实验室的工作区域处应有存放个人衣物的条
件.
6、 在实验室所有的建筑内配备高压蒸汽灭菌器,
并按期检查和验证,以保证符合要求.
7、 在实验室内配备生物安全柜.
8、 设洗眼设施,必要时应有应急喷淋装置.
9、 考虑机械通风,如使用窗户自然通风,有防虫
纱窗.
10、有可靠的电力供应和应急照明.必要时,重要
设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用
电源.
11、实验室出口有在黑暗是可明确辨认的标识.
万级无菌室是微生物里面的指标要求达到一个点,比如尘埃粒子,沉降菌,气压,温度,湿度,光照度,等等

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